HPLC-DAD-ELSD法同时测定赤芍中芍药苷和白芍苷的含量外文翻译资料

 2022-08-08 09:08

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HPLC-DAD-ELSD法同时测定赤芍中芍药苷和白芍苷的含量

作者：MEI-XIA ZHU1, SHENG-NAN LI1, HAI-DAN YOU2, BIN HAN3, ZHI-PING WANG1,YAN-XI HU1,JIN LI1, AND YU-FENG LIU1,4,lowast;

研究机构：1College of Pharmacy, Liaoning University, Shenyang 110036, P.R. China 2Research Institute of Liaoning Province, Shenyang 110015, P.R. China 3College of Pharmacy, Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, P.R. China 4Natural Products Pharmaceutical Engineering Technology Research Center of Liaoning Province, Shenyang 110036, P.R. China

电子邮件：liuyufeng@bjmu.edu.cn

摘要：建立了高效液相色谱-光电二极管阵列检测-蒸发光散射检测法(HPLC-DAD-ELSD)同时测定赤芍中芍药苷和白芍苷含量的方法。色谱柱为Diamonsil C18 (4.6 mm times; 250 mm, 5 mu;m)，流动相为乙腈-甲酸水溶液(0.05% v/v)，梯度洗脱，流速为1.0 mL∙ minminus;1。DAD的检测波长为230 nm, ELSD的蒸发器管温度110℃，雾化气体流量为3 L∙ minminus;1。柱温保持在30℃。芍药苷和白芍苷在0.050 ~ 1.510 mg∙ mLminus;1和1.007 ~ 5.035 mg mLminus;1范围内呈线性关系。芍药苷和白芍苷的加标回收率分别为96.2 ~ 102.9%和95.0 ~ 102.4%，相对标准偏差(RSD)为0.2 ~ 2.5%。该方法快速、简便、准确、专属性强。该方法可用于赤芍药材的质量控制。该方法可作为控制赤芍药材质量的有效手段。

关键词：HPLC–DAD–ELSD, 赤芍, 芍药苷， 白芍苷

简介

赤芍(RPR)是芍药或川赤芍的干燥根[1]，已被中医广泛用于治疗心血管疾病、炎症和女性生殖疾病[2]。根据中医原理，历史文献记载RPR具有补血、凉血、清热、活血的作用[3]。近年来大量研究[4]表明，赤芍具有凝血、动脉粥样硬化、血栓形成、保护心脏和肝脏等作用，具有广阔的应用前景。赤芍中的主要活性成分[5,6]包括芍药苷、白芍苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜苷类，统称为总芍药苷(TPG)。RPR中最丰富、最有效的成分是芍药苷(PF)和白芍苷(AF)[7,8]，有报道称其具有解热、抗过敏、抗氧化、抗炎、抗焦虑等多种生物学活性[9-12]。针对赤芍药材质量控制方法，采用高效液相色谱法(HPLC)单独测定芍药苷;白芍苷和芍药苷;或将芍药苷、白芍苷和苯甲酰芍药苷结合在一起[13-16]。然而，采用高效液相色谱结合光电二极管阵列检测和蒸发光散射检测(HPLC–DAD–ELSD)同时测定芍药苷和白芍苷的研究尚未见报道。为进一步研究开发赤芍奠定了基础。

实验仪器

采用Dikma Diamonsil C18 (4.6 mm times; 250 mm, 5 mu;m)色谱柱，采用装有四元泵、柱室、自动进样系统(100micro;L循环)和Alltech ES2000 ELSD (Alltech Corporation, USA)的Agilent 1200高效液相色谱系统进行分析。qe - 200g中药粉碎机购自中国立得工具有限公司。AB265-S 十万分之一的分析天平购自瑞士梅特勒托莱多公司。

化学药品和试剂

本实验室分离得到芍药苷和芍药苷，并根据其光谱数据(紫外、红外、质谱、质子核磁共振、碳核磁共振)对其结构进行了鉴定。HPLC法测定芍药苷、白芍苷纯度均大于98.0%。高效液相色谱级乙腈、甲醇和甲酸购自山东禹王化工公司。其他试剂均为分析级。

标准的解决方案

芍药苷和白芍苷标准备液分别在浓度为10.070和3.020 mg mLminus;1的甲醇水溶液(70% v/v)中配制，保存在minus;20℃。将芍药苷标准备液在校准曲线制备前立即用70% v/v的甲醇水溶液稀释至浓度为1.007、1.510、2.014、3.021、4.028、5.035 mg mLminus;1。以0.050、0.151、0.302、0.906、1.208和1.510 mg mLminus;1的浓度配制白芍苷的校准曲线。溶液经0.45 mu;m滤膜过滤后进行HPLC分析。

示例解决方案

赤芍样品(标记为1 ~ 9)来自9个产地。将干燥的芍药根样品粉碎后，用20目筛筛过。取1.00 g赤芍粉末样品，加10 mL甲醇水溶液(70% v/v)浸泡1 h，微沸点萃取1 h，冷却至室温称量，加入甲醇水溶液(70% v/v)减重。提取液经滤纸过滤后，经0.45 mu;m微孔膜过滤，HPLC分析。

色谱条件

流动相为乙腈(A)和甲酸水溶液(0.05% v/v) (B)，溶剂A和B的比例为14:86 (v/v)，流动相流速为1.0 mL∙ min-1。DAD的检测波长为230 nm。柱温为30℃，进样量为5 mu;L。ELSD的蒸发器管温度设置110℃，雾化气体流量为3 L / min，攻角处于关闭状态。

校准曲线

通过对6种不同浓度的标准溶液进行分析，建立了标定曲线。标准品回归方程为Y = A times; X B，其中Y为峰面积，X为样品浓度。将芍药苷、芍药苷原液稀释至较低浓度后逐渐稀释，反复检测。信噪比(S/N)分别为10:1和3:1检测定量限和检测限。

方法验证

对方法的精密度、重复性、日内和日间稳定性以及样品回收率进行了评价。通过连续分析6次同一样品溶液和同一贴片样品的6次重复，分别评估其精密度和重复性。分别在0、2、4、8、12、24 h将上述样品溶液注入仪器，以评价溶液的日内稳定性。分析一个样品在4天周期(1、2、3、4天)来评价溶液的日间稳定性。通过向测试样品中加入已知数量的标准品来确定回收率，通过外部标准品线性回归比较添加量和获得量来计算回收率。

统计定量

根据“样品溶液”章节制备了9种不同来源的赤芍，用于下一步的测试溶液操作。每个源的样品被平行操作三份，色谱条件按照“色谱条件”部分进行。定量依据线性回归分析拟合的校准曲线。

结果与讨论选择流动相

测定了甲醇-水、乙腈-水、乙腈-甲酸水溶液(0.05% v/v)的流动相。结果表明，当乙腈(a)和甲酸水溶液(0.05% v/v) (B)的含量为14:86 (v/v)时，样品中芍药苷和白芍苷的色谱分离效果较好，峰形较好。

方法验证

相对标准偏差(RSD) 的值分析物的峰面积法精度、重复性、稳定性和盘中精度从0.30%降至2.7%。样本复苏的结果表明,分析物的平均回收率从95.0%降至102.9%。所有这些结果暗示决心的建立方法是有效的和可行的。

结果分析

在这项研究中，测定了来自9个不同来源的样本。DAD测定芍药苷含量范围为2.2064 ~ 4.3565 mg mLminus;1，白芍苷含量范围为0.0780 ~ 1.1543 mg mLminus;1。经ELSD检测，芍药苷的含量范围为2.1105 ~ 4.3324 mg mLminus;1，白芍苷的含量范围为0.0815 ~ 1.1792 mg mLminus;1。9个产地的芍药苷含量范围为2.11-4.36% (w/w)，符合《2015年中国药典[1]》标准，其中芍药苷含量应不低于1.8% (w/w)。

黑龙江样品中芍药苷含量最高，分别为4.3565 mg mLminus;1 (DAD)和4.3324 mg mLminus;1 (ELSD)，辽宁西峰样品中芍药苷含量最低，分别为2.2064 mg mLminus;1 (DAD)和2.1105 mg mLminus;1 (ELSD)。浙江样品中白芍苷含量最高，分别为1.1543 mg mLminus;1 (DAD)和1.1572 mg mLminus;1 (ELSD)，内蒙古样品中含量最低，分别为0.0780 mg mLminus;1 (DAD)和0.0815 mg mLminus;1 (ELSD)。9个产地样品中芍药苷和白芍苷含量存在差异，这可能与芍药生长方式、生长年限、土壤条件、采收期等因素有关。山东、河北、唐山和浙江样品中芍药苷含量相近。辽宁西峰、安徽和河北唐山样品中白芍苷含量相近，与DAD和ELSD值一致。浙江样品中芍药苷和白芍苷含量较高，质量较好。

中药的临床应用和治疗效果更加协调。中医不同于西医，它是建立在对其复杂成分协同作用的基础上的[17-20]。中药的质量控制方法大多依赖于选择某一种或某些成分作为参考指标，仅用几种所谓的指标成分[16]不能代表中药的全部性质。随着质量标准和质量控制的不断提高，可以检测出多种中药活性成分，从而更好地进行质量控制。

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