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维吾尔药香青兰对慢性高原病大鼠模型的治疗作用
Dilinuer Maimaitiyiming, Guangmei Hu, Ainiwaer Aikemu, Shi Wen Hui, Xiangyang Zhang
新疆医科大学第一附属医院心血管内科,新疆医科大学药物分析究室,兰州军区乌鲁木齐总医院动物实验室,中国新疆乌鲁木齐市830011
摘要
目的:传统维吾尔医药香青兰具有一些关键的心脏活动。然而,至今为止,还没有关于使用香青兰治疗慢性高山病(CMS)的报道,是一种影响高海拔居民的医疗状况。本研究旨在探讨香青兰对CMS的治疗效果。
材料和方法:入选的100只斯普拉格道利斯大鼠中的80只在模拟的高海拔环境中饲养,其余20只大鼠保存在平原中。准备了香青兰的水和乙醇提取物。制备CMS大鼠模型,取出大鼠心脏进行组织病理学分析。采集血液样本进行血液学和生化分析,测定大鼠肺动脉压力以研究治疗效力。
结果:CMS模型组白细胞介素6(IL-6),C反应蛋白(CRP)和丙二醛(MDA)水平显着高于对照组; 而SOD和GSH-Px浓度下降。 香青兰可以提高这些水平,降低肺动脉压力,改善心脏病理状态。 结论:研究结果表明,IL-6,CRP,MDA,SOD和GSH-Px参与和介导CMS的形成,并且发现香青兰对CMS有显着影响。 本研究探讨了高原病的基础知识,为维吾尔药在高原病治疗上的进一步发展奠定了基础。进一步的临床前和临床研究,更多的样本量建议。
关键词:高原病,香青兰,心肌缺血
绪论
香青兰是唇形科一年生草本植物,以巴迪然吉布亚的名义用于传统维吾尔医学数百年。香青兰对下列疾病具有重要的药用价值:支气管炎,高血压,肝炎,头晕,胆道感染和其他疾病。 香青兰的水提取物在动物实验中发现具有抗缺血作用,其显着延长缺氧下的存活时间,对异丙基肾上腺素诱导的心肌耗氧量增加起作用,改善缺氧耐受性,对抗加压素诱导急性ST-T改变导致心肌缺血,降低心率,延长PR间期[1~5]。
香青兰主要产于东北,华北和华北的几个省份; 新疆东南部资源丰富。由于维吾尔医药的许多经典书籍已经报道了它的用途,香青兰有着悠久的历史。 该药天然温热,有香气,对脑神经,咳嗽,哮喘,心脏组织,利尿,血液循环和复苏等都有发挥作用,一部分新疆地区少数民族人口使用这种草药,民间社会将其作为维吾尔族医学用于治疗冠心病,神经性头痛,感冒,支气管炎等,也用于提高血液质量。
慢性高原病(CMS)是高海拔地区居民红细胞压积增加和红细胞增多过多的医学病症。它在1925年由秘鲁医生Carlos Monge首次描述之后,也被称“Monge病”。减少低氧血症和肺泡通气不足等病理生理状况可以作为CMS的最终治疗目标[6]。肺动脉高压经常伴有,可能导致充血性心力衰竭。由于肺泡通气不足导致的低氧血症可能在红细胞生成过度刺激中起中心作用,导致红细胞量和血液粘度增加,全身性和肺动脉高压[7]。迄今为止,虽然草药已显示有效的心脏活动,但目前还没有关于使用莫拉维奇对CMS的报道[8,9]。因此,本研究旨在探讨香青兰对大鼠CMS模型的影响。
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材料和方法
- 化学品和试剂
实验用仪器见表1.1,实验用试剂见表1.2
表1.1实验用仪器
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仪器名称 |
型号 |
生产地 |
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微板读数器 洗衣机 微型高速离心机 水套培养箱 |
352 AC8 TG16W GNP-9080 |
芬兰 芬兰 中国上海 中国上海 |
表1.2实验用试剂
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试剂名称 |
批号 |
生产厂家 |
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大鼠白细胞介素-6(IL-6) 大鼠C-反应蛋白(CRP) 超氧化物歧化酶(SOD) 谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px) 丙二醛(MDA) |
74350026 3400630 20130410 20130401 20130409 |
eBioscience公司(美国圣地亚哥) 西唐生物技术公司 有限公司(中国上海) 南京建成生物工程研究所 南京建成生物工程研究所 南京建成生物工程研究所 |
1. 2 香青兰提取物
为了本研究的目的,使用以下两种香青兰提取物:水和酒精。为制备香青兰酒精组(DMLAG)的提取物,将1000g的香青兰加入3000ml的甲醇中,回流3小时,过滤。过滤后的提取物放在冰箱中。为了制备香青兰(DMLWG)的提取物,1000g的香青兰加入3000ml水,回流3小时,过滤。过滤后的提取物放在冰箱中。0.4ml给药中2g / kg 香青兰甲醇提取物,0.4ml给药中2g / kg 香青兰水溶液提取物。
1.3 动物和治疗组
新疆乌鲁木齐新疆医科大学实验动物中心提供100只健康SD大鼠(两性,体重160-200g)(许可证编号:SCXK(新)2011-0004)。其中,在医疗保障平和西北地区和战时特殊环境人工(位于兰州军区乌鲁木齐总医院)的低压室饲养80只大鼠。用于这些大鼠的条件包括:模拟海拔5000米,温度18-26℃,湿度40-60%,压力54.1千帕(391.4毫米汞柱),氧分压10.84千帕(80.8毫米汞柱)。高原环境30天后,将这80只大鼠进一步随机分成四组(每组20只):
1 高原模型组(MG),在高海拔环境下持续喂食15天没有药物干预的慢性高原模型组。
2 阳性对照组(NE),在高海拔环境下接受硝苯地平2.7mg / kg并持续喂养15天。
3 香青兰水提取物组(DMLAG),通过每天一次灌胃方式接受0.4ml的香青兰的水提取物并在高海拔环境中连续喂养15天。
4 香青兰酒精提取物组(DMLWG),通过每天一次灌胃方式接受0.4ml的香青兰的酒精提取物,并在高海拔环境下继续饲养15天。
剩余的20只大鼠用作对照,并保存在平原(CG)中。他们喂食标准饮食和蒸馏水,并保持在温度18-26°C,海拔700米的清洁环境中45天。没有对平原使用的老鼠进行药物干预。所有大鼠在一致条件下喂食,并且四十五天中每天测试以下项目:大鼠的行为,自发活动,喂食,饮酒,头发,粪便,尿,眼,耳朵,鼻子,嘴巴(有或没有分泌物 )和体重。
·1.4 病理检查
将氯胺酮(100mg / 2ml) 地西泮(10mg / 2ml) 阿托品(0.5mg / ml)混合均匀,然后稀释并倍增至10ml,然后将稀释的液体以0.75ml / 100g腹膜内注射。 麻醉并断头后,迅速剖开心脏并立即用生理盐水洗涤并固定在10%福尔马林缓冲液中。使用苏木精和伊红制备大鼠心脏石蜡块。在奥林巴斯(Magnus MVX 10)中国有限公司光学显微镜下检查染色切片并照相, 检查不同治疗组的病理变化。
1.5 炎症介质的测定
根据眼眶静脉窦血液样本采集程序,[10,11]室温下收集大鼠眼球血样,3000转每分钟离心20min,分离出上清液。 根据制造商对各种试剂盒的说明,确定炎症介质如CRP,IL-6,MDA,SOD和GSH-Px。
1.6 检测肺动脉压力仪器和试剂
检测肺动脉压力实验设备见表1.3,实验试剂见表1.4
表1.3 检测肺动脉压力设备
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仪器名称 |
生产厂家 |
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西北特种环境人工实验模块 BL-420生物与功能实验系统及压力传感器 小动物呼吸机 操作星光灯 15厘米的无菌聚乙烯管 大鼠气管插管; 大鼠动脉夹 注射器(1毫米) 组织剪 眼科剪刀 眼科钳 止血钳 持针器 操作刀片 三肢管 |
兰州军区乌鲁木齐总医院 成都泰盟设备公司 成都泰盟设备公司 - - - - - - - - - - - - |
表1.4 检测肺动脉压力试剂
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试剂名称 |
生产厂家 |
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无热原蒸馏水 生理盐水 肝素(5IU / ml) |
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1.7 仪器描述
西北特殊环境人工人工实验模块:该研究项目由兰州军区乌鲁木齐总医院主持。舱内的特点是按照设计标准,在舱内准确模拟海拔600至10000米的低压低氧状态,环境温度 500℃至-50℃。机舱可以实现单一的气候模拟,也可以实现复杂的气候模拟,例如:同时实现低压,寒冷,强紫外辐射和高温干旱环境的高海拔环境。该装置由两个喷气引擎调节和一个过渡舱组成。包括五个系统:机舱结构系统,环境控制系统,燃气管线控制系统,自动化控制系统,电视监控系统以及五套系统的应急预案,舱内总容量m3,一次可容纳20人。该装置可为高原,寒冷,低氧,沙漠,强紫外等特殊气象环境下的人类环境适应机理及相关疾病发病机理研究提供新的实验平台;促进西北特殊环境地区的驯化和疾病控制措施以及人类生理和疾病治疗。
1.7.1 BL-420生物和功能实验系统和压力传感器
这是记录动物血压的工具。将动物压力变化信号通过压力信号转换装置(压力传感器)转换成电信号,输入计算机进行放大,显示和记录。
1.7.2压力传感器的校准
传感器的校准是实验中的重要步骤。 它包括归零放大器和校准压力传感器。 首先,零点校准,如果小于零,则需要对传感器进行微调; 其次,标准压力(100 mmHg)校准。 完成这两个步骤后,您可以开始实验。
1.7.3 ECG测量
还使用BL-420生物和功能实验系统。 使用动物标准连接标准的心电图来领导。 白色电极连接至右前肢,红色电极白色电极连接右前肢,红色电极连接至左后肢,黑色电极连接至右后肢。 工作原理和压力测量类似。
1.7.4 小动物呼吸机
其目的是为了防止开胸术后动物自主呼吸循环的丧失。 使用Y型管将动物连接到呼吸机,呼吸频率为60次/分钟,潮气量为6ml / kg,呼吸比为3:2。
1.7.5 测定方法
气管插管:大鼠沿颈中线仰卧位固定。 进行皮下皮肤的切开和钝性解剖,并且将气管与子线倒T形切口的部分一起暴露。 气管内插管固定,气管导管直接连接呼吸机。 呼吸机频率调整为60次/分,潮气量为6ml / kg,呼吸比为3:2。
颈动脉插管:大鼠沿颈中线仰卧位固定。 切开皮下皮肤钝性分离物,暴露颈动脉,固定插管。 然后通过输入压力变化到生物信号记录器连接压力传感器记录实验数据。
肺动脉压和右心室压测量:使用肝素化生理盐水针在右心室的右上角测量心室压力和肺动脉压,并且肉眼观察针的位置。 将使用压力传感器制成的针和导管的另一端连接到生物信号记录器的压力变化以记录实验数据[10,11]。
1.8 统计方法
数值表示为平均值plusmn;标准偏差。单因素方差分析用于平均数的组比较。 LSD测试被用于手段的事后比较。所有统计分析均使用SPSS for Windows(版本17.0; SPSS Inc.USA)进行,并且P lt;0.05被统计学认为是显著的。
2 结果
2.1 病理检查
在图6的病理学检查中,CG组高功率和低功率视图显示心脏的正常组织结构,没有任何病理学发现。心肌细胞染色清晰,核心密集,心肌纤维整齐排列。 MG组表现为心外膜血管轻度充血,心肌间质血管充血,低倍镜下横纹不清;而高倍视野则表现为部分心肌肿胀,细胞质颗粒变性,部分心肌纤维嗜酸性细胞变性,偶有炎性细胞浸润。低能量观察显示NE组心肌间质血管扩张充血和血管充血不明显,而高能量观察显示心肌细胞轻度水肿和少量心肌细胞嗜酸性变性。在DMLAG组,低功率视图显示非心外膜心肌充血,心肌间质血管明显充血,而高倍视图显示心肌细胞水肿和散在嗜酸性粒细胞变性。在DMLWG组,在低倍镜下观察到心外膜下充血和心肌间质血管明显扩张或充血,而高倍视野显示少量心肌细胞水肿和偶有嗜酸性变性。 DMLWG组与模型组相比,心脏病理学有明显改善。与模型组相比,DMLWG组病理条件接近正常DMLAG组,并且在心脏病理学方面有一定的改善。
2.2 香青兰对IL-6,CRP,MDA,SOD和GSH-Px的治疗作用
香青兰对IL-6,CRP,MDA,SOD和GSH-Px的治疗效果显示在(图1-5)中。 MG组的SOD和GSH-Px浓度均低于CG组。MG组IL-6,CRP和MDA浓度高于CG组。DMLWG组动物的SO
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