包封酮洛芬 – 环糊精复合物的脂质体的制备和表征用于透皮给药外文翻译资料

 2022-01-11 10:01

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包封酮洛芬 - 环糊精复合物的脂质体的制备和表征用于透皮给药

弗朗西丝卡·梅斯特雷利a, MariaLuısaGonza#39;lez-Rodr#39;ıguezb,

Antonio Maria Rabasco b, P奥拉穆拉a,lowast;

a佛罗伦萨大学药学院药学系，Via U. Schiff 6,50019 Sesto Fiorentino，佛罗伦萨，意大利

b塞维利亚大学药学院制药技术系，C / Prof。Garc#39;ıaGonza#39;lez2,41012塞维利亚，西班牙

摘要

制备含有用于药物局部递送的酮洛芬 - 环糊精复合物的多层囊泡（MLV）脂质体，目的是同时利用两种载体的有利性质。药物复合物通过共蒸发和密封加热方法制备的beta;-环糊精（ beta;Cyd）和羟丙基beta;-Cyd（HP beta;Cyd），通过差示扫描量热法，热台显微镜，扫描电子显微镜和测试溶解性质来表征。具有HPbeta; Cyd的共蒸发系统是最有效的，使药物溶出度增加约11倍。将药物和药物beta;-Cyd系统掺入通过薄层蒸发技术制备的MLV脂质体中。使用透析，光散射和透射电子显微镜技术分别表征所有脂质体制剂的包封效率，粒度和形态。Cyd的存在对MLV的形成产生了负面影响;然而，有可能制备含有酮洛芬beta;-Cyd复合物的稳定MLV。Cyd复合物的存在影响MLV尺寸，但不影响它们的层状结构。与HPbeta; Cyd的复合体，由于其稳定性比较高Cyd一，允许更高百分比的封装，并产生更稳定的MLV系统。药物和药物beta;-Cyd复合物的渗透性研究本身或掺入脂质体中，在人工膜和大鼠皮肤上进行，强调了Cyd对药物渗透速率的有利影响，由于其溶解作用;相比之下，出乎意料的是，没有证明脂质体的皮肤渗透增强剂性质。用罗丹明beta;-Cyd复合物作为荧光标记物进行的共聚焦激光扫描显微镜研究证实了这样的结果，表明标记物在溶液中时比在包埋在脂质体中时渗透到大鼠皮肤层更深。

关键词：酮洛芬;环糊精;脂质体;皮肤渗透研究

1. 介绍

酮洛芬是一种非甾体抗炎药，几乎不溶于水，广泛使用作为镇痛剂和用于类风湿性关节炎和骨关节炎的急性和长期治疗。其短暂的消除半衰期和不良反应，如胃肠粘膜溃疡，限制其口服使用，使其成为 透 皮 给 药 的 良好候选者（ Cordero 等 ，1997,2001;Hadgraft等，2000）。 然而，由于皮肤具有优异的屏障功能，因此需要使用安全有效的增强剂来改善药物的透皮吸收（ Irion 等，1995;Sinh等，1996;赵和 Choi, 1998年;Sridevi和Diwan，2002）。

脂质体已被广泛用作局部给药系统的安全有效载体，因为尽管存在关于可能的载体介导的皮肤摄取现象的有争议的文献（Alvarez-Roma#39;nNaik等，2004），在一些情况下，他们允许有效的药物渗透和提高临床疗效（ Gregoriadis, 2000年;Verma等 人，2003a,b). 然而，在脂质体膜的脂质双层中捕获水溶性差的药物通常在药物与脂质的质量比方面受到限制，并且需要使用有机溶剂（McCormack和Gregoriadis，1994;Gre戈里迪斯2000). 此外，脂质体通过皮肤层的载体功能通常实际上不能用于亲脂性药物，当其掺入膜双层而不是包埋在囊泡的水性核心中时，在给药后迅速从载体释放（Takino等，1994）。

环糊精已被广泛用于通过在其疏水腔中包含络合来提高许多亲脂性药物的溶解度和溶出速率（Uekama和Otagiri，1987).还研究了环糊精作为药物经皮吸收的可能增强剂的作用（洛夫茨松 等，1998;Loftsson和Masson，2001）。似乎环糊精可以通过增加其在载体中的热力学活性来改善皮肤的皮肤吸收，并且有利于它们递送到皮肤表面（Loftsson等，1998;Matsuda和Arima，1999年; Masson等，1999）但是，没有清楚地证明环糊精在皮肤层上的载体功能。

最近，已经提出以水溶性环糊精包合复合物的形式包封在亲脂性药物脂质体的水相中作为避免与系统和组合相关的问题的可能方法。它们在单一系统中的相对优势。该概念通过连接亲脂性药物的脂质体和环糊精复合物并形成药物中的环糊精 - 脂质体制剂，建立了药物递送的新系统。（麦科马克 和 Gregoriadis, 1994 年 , 1998年;Loukas等，1995,1998）。

因此，这项工作的目的是制备用于局部药物递送的脂质体，其在水性核心中含有酮洛芬 - 环糊精复合物，目的是通过同时开发环糊精来增加囊泡中药物包封稳定性及其临床功效。通过皮肤层向药物和脂质体载体的增溶作用。

环糊精在提高酮洛芬溶解度和溶出速率方面的有效性已得到证实（Funk等，1993;Mura等 人， 1998). 本文为了选择最有效的环糊精和酮洛芬络合的制备方法，采用共蒸发法和密封加热法制备了药物 - 环糊精与天然 -环糊精及其羟丙基衍生物的配合物，采用差示扫描量热法进行了研究。先用热台显微镜，扫描电子显微镜和测试溶解

性能。然后将单独的药物和选择的药物 - 环糊精复合物掺入通过薄层蒸发技术制备的脂质体中。使用透析，光散射和透射电子显微镜技术分别表征所有脂质体制剂的包封效率，粒度和形态。通过切除的大鼠皮肤和人工亲脂膜评估这些系统的渗透性。通过共聚焦激光扫描显微术，使用包封环糊精复合物和罗丹明6G作为荧光标记物的脂质体，研究脂质体膜结构和完整性以及囊泡渗透到大鼠皮肤中的能力。

2. 材料和方法

2.1. 物料

酮洛芬（酮），l-alpha;-磷脂酰胆碱（PC），胆固醇（ CH ）和罗丹明 6G （ Rho ）由 Sigma-Aldrich公司（意大利）提供，beta; -环糊精（ beta;Cyd）来自Wacker公司（意大利）的羟丙基beta;-Cyd（HP beta;Cyd）DS 0.6。所有其他试剂均为分析级。

2.2. 药物 - 环糊精固体系统的制备

根据摩尔比方法进行的以前的相溶解度研究和C核磁共振（C-NMR）分析解释了1：1酮-beta;Cyd和酮-HPszlig;Cyd络合物的形成（Mura等人1998）。通过翻滚混合15分钟适当量的各个简单组分，再通过75-150-mu;m筛网粒度级分获得等摩尔药物beta;-Cyd物理混合物（PM）。通过将物理混合物（1g）密封5mL玻璃安瓿中获得密封加热的产品（SH），然后将其在80℃ 加热3小时。通过在 55 ℃下在旋转蒸发器（ Buchi R200/205）中共蒸发等摩尔药物beta;-Cyd乙醇 - 水（5： 5v / v）溶液制备共蒸发产物（COE）。筛分所有产物（Retsch，型号Vibro），并将75-150-mu;m筛网粒度级分用于以下研究。

2.3. 药物 - 环糊精固体系统的表征

2.3.1. 差示扫描量热法（DSC）

使用装配有 Mettler FP80 处理器的 Mettler FP85TA装置在5-10mg样品（Mettler M3微量天平）上进行DSC分析，所述样品在30和300 ◦C之间在10◦C minminus;1下穿孔的Al盘中扫描。静态空气。

2.3.2. 热台显微镜（HSM）

使用配有Mettler FP-82热台的Olympus BH-2显微镜进行HSM分析。将少量样品置于样品台上并在30-300 ◦C温度范围内以2 ◦C minminus;1的速率加热。

2.3.3. 扫描电子显微镜（SEM）

使用Philips XL 30扫描电子显微镜进行SEM分析。简而言之，在检查之前，使用双面胶带将样品固定在黄铜短管上，并在氩气氛下溅射涂覆金 - 钯（以呈现它们是导电的）在高真空蒸发器中使用金溅射模块。然后使用在20kV的激发电压下设定的SEM拍摄照片。选择的放大倍数足以详细了解所研究样品的一般形态。

2.3.4. 溶出度研究

根据USP 26篮法，使用Sotax AT7装置（Sotax AG公司，瑞士）进行溶出试验，在Cyds的二元系统中加入过量的药物或其等量的量，在25plusmn;0.5 ◦ C下加入500mL水 ，在50rpm的恒定搅拌下。在合适的时间间隔，取出等分试plusmn;样并用光谱法测定260nm处的药物含量（Hitachi，Mod.2000光谱仪）。每个测试一式三份进行（变异系数CV lt;3％）。

2.4. 脂质体制备和表征

2.4.1. 脂质体制剂

通过薄层蒸发技术制备PC-CH脂质体（Bangham等，1965），获得多层囊泡（MLV）。简而言之，将脂质相（由60mg PC和40mg CH的混合物组成）溶解在最少量的有机溶剂（氯仿）中;然后在55℃下使用旋转蒸发器（Buchi R 200/205）在减压下除去，从而在烧瓶壁上获得干燥脂质的薄膜。在出现干燥残余物后继续蒸发2小时，以除去痕量的有机溶剂。最后，在剧烈搅拌下通过加入4mL蒸馏水使膜水合，以有利于囊泡的形成。单独的药物（5mg）或其作为药物beta;-Cyd复合物的等量以两种不同的方式包埋在囊泡中：第一种与脂质相一起溶解在有机溶剂中，而水溶性复合物溶解在水性中。加入脂质膜水合作用的相。将脂质体储存在4◦C。

2.4.2. 封装效率的确定

通过使用透析技术测定未包埋的酮的量来测量脂质体包封效率（ EE ％）（ Trotta 等人，2002;Foco等，2005).在之前的论文中有些。我们证明了这种方法的适用性，与超速离心技术相比，其结果没有显示出统计学上的显着差异（Lo#39;pez-Pinto et al。，2005).为了将未包埋的药物与脂质体分离，将2mL装载药物的脂质体分散体置于醋酸纤维素透析袋中（Spectra / Porreg;，MW截止值12000，Spectrum，Canada），将其浸入150mL将水4 ◦C以30rpm磁力搅拌。在预定时间从接收器溶液中取出的样品（10mL）用等体积的淡水代替，并在260nm下进行光谱测定法测定药物含量（Hitachi Mod.2000光谱仪）。当在随后的接收相取出中获得恒定的药物浓度值时（考虑到培养基的逐渐稀释），停止实验。然后根据以下等式计算封装效率：

EE% =[总药物] - [扩散药物]

[总药物]

2.4.3. 脂质体大小的测定

通过动态光散射分析（Mastersizer，MalvernInstruments，Malvern，UK）使用波长为632.8nm的He-Ne激光辐射测量囊泡的平均粒度，以体积直径表示。将约3mL脂质体分散体在25L ◦C下在1L蒸馏水中适当稀释，以避免多次散射现象。将样品置于石英池中，并通过计算机控制的图像系统通过45mm聚焦透镜进行分析。测量在25 ◦C和散射角90◦ 下进行，具有以下实验参数：中等折射率，1.330;中等粘度，1.0 cps;实验一式三份进行，每个样品分析三次。通过Malvern PCS亚微米粒子分析仪进行相关函数，并使用三阶累积拟合来获得平均直径和多分散指数（Berne and Pecora，1976）。

2.4.4. 透射电子显微镜（TEM）

TEM分析（Philips CM 10，Philips，USA）用于检查脂质体的超微结构。为了制备样品，用溶液涂覆铜网格然后沉积胶状体然后滴一滴脂质体分散体并保持接触15分钟。最后，拾取网格，用滤纸吸干，干燥 3 分钟，然后用 TEM 分析（马诺斯罗伊等，2004）。

2.4.5.共聚焦激光扫描显微镜（CLSM）

进行CLSM研究以直接在溶液中表征脂质体形态和层状结构。对一滴适当稀释的新制备的含有Rho或Rho-Cyd复合物的脂质体分散体进行分析（10minus;5M）使用Leica TCS SP作为荧光标记物II激光扫描共聚焦成像系统（Leica，Heidelberg，德国），配备Kr-Ar-He-Ne离子激光器和Leica DM IRE 2显微镜，配有HC PL Fluotar Leica X10和X20干物镜和HCX PLAN APO Leica X40 multi -浸没物镜（数值孔径0.85）。为了激发使用488nm波长的荧光标记，在520nm检测荧光发射。还通过可视化模型荧光化合物在皮肤中的分布来进行CLSM研究以评估脂质体的实际载体功能。在Rho-Cyd复合物本身或包埋在脂质体溶液存在下，在Franz扩散细胞中孵育6小时后，用液氮快速冷冻大鼠皮肤;然后用低温切片机垂直切割皮肤切片（50mu;m厚）并检查以研究不同皮肤层中的荧光标记物分（Verma等，2003a）。

2.5.渗透研究

使用 Franz 扩散池（ Vidrafoc ,Barcelona ，Spain）在371 ◦C下进行单独或与Cyd复合的药物的渗透研究，包括原样或包埋在MLV系统中24小时，有效扩散表面为2.54 cm2和14.5mL体积的接收室，由脱气的pH组成7.4 磷 酸 盐 缓 冲 溶 液（ Bosman 等 ， 1998;Kirjavainen等，1999）。渗透实验以闭塞模式进行。给供体隔室填充3mL药物或药物beta;-Cyd复合物的水性悬浮液或含有的脂质体悬浮液普通药物或药物-Cyd复合物被捕获,所有相应的总药物量为5毫克。药物在接收介质中的溶解度为 1.45 mg / mL，从而确保在扩散实验期间维持沉降条件。小心地去除扩散膜下侧和接收室中溶液之间的任何气

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资料编号：[1608]

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