中草药【CHM】国际标准期刊编号 1674-6384
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[医]研究论文，原著
11种常用中药对人细胞色素P 450酶抑制作用的筛选
1.中国医学科学院暨北京协和医学院药用植物发展研究所，北京100193
2.药学系，毕节市第一人民医院毕节551700，中国
文章信息
文章历史
收到日期：2016年11月6日
修订日期：2017年1月11日
接受：2017年2月10日在线：
April 10, 2017
理论
目的：中药作为天然治疗药物，在世界范围内得到了广泛的应用和重视。然而，关于它们的信息导致了药草INT。 细胞色素P 450(CYP)酶介导的反应是有限的。本研究旨在评价11种常用中药，包括龙胆叶、人参根的抑制作用。 A、酸枣仁、菊花、忍冬、枸杞、仙人掌、茯苓、山楂、五味子和何首乌。 JOR CYP同工酶2C19、2D6、3A4、2E1和2C9。方法采用体外鸡尾酒法。结果所有被测中药水提物均无明显抑制作用，IC 50 va。 高于100mu;g/mL。而一些草药的乙醇提取物则表现出更强的抑制作用。这些草药包括对CYP2D6和CYP的IC 50值分别为12.05和61.43mu;g/mL的龙葵叶。 2E1、五味子对CYP2C19和CYP3A4的IC 50分别为64.42和47.24mu;g/mL，菊花对CYP2C9的IC 50分别为45.25mu;g/mL。结论共行政 这些中药及其产物与传统药物的接触值得关注，其对CYP酶活性的潜在抑制作用有待进一步研究。
关键词
鸡尾酒；细胞色素P 450；药物-药物相互作用；抑制作用；中药
1、介绍
中医已有2000多年的历史，是医疗保健的重要组成部分。中国的制度。许多中药被广泛用于治疗各种慢性疾病。 疾病，如心血管疾病，肝炎，糖尿病和癌症。近年来，中药或植物食品补充剂受到越来越多的关注。许多中药广泛用于治疗各种慢性疾病，如心血管疾病、肝炎、糖尿病和癌症。最近，中药或植物食品补充剂已经收到了很多。 在许多西方国家重新重视作为补充或替代医疗体系的问题(夏等人，2011年；肖等人，2012年)
细胞色素P450（CYP）是第一代药物代谢酶系统，在内源性和外源性物质代谢中起重要作用。 CYP酶不仅在 肝脏，但也存在于其他组织中，如胃肠、肺、脑、肾等(Seliskar和Rozman，2007年)。CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4和CYP2E1是人体内的主要同工酶。 并负责90%以上的市场药物的代谢(周永康，2003年)。
药物与药物的相互作用是药物联合使用时经常发生的现象。一种药物可以通过抑制或诱导一些相关的代谢酶来改变其他药物的代谢清除。大 某些酶活性的诱导可能导致血药浓度降低，从而降低联用药物的临床疗效（马科维茨等，2003）。相反，该 抑制该酶的活性可能会导致药物血液水平的增加，从而产生一些不良或有毒影响，甚至是致命的风险(Li等人，2011年)。
目前，中药在我国等国家的应用越来越广泛，对人体健康有着重要的益处。大多数消费者认为草药是无毒和安全的。在 事实上，每一种中药都含有大量的成分，这可能导致与其他处方药的相互作用(strandell等人，2004年；taki等人，2012年)。 )。在美国，近20%同时使用至少一种草药产品的患者有可能患上潜在的高密度感染(Henderson等人，1999年)。在中国，人口使用中医促进 健康水平远高于美国。很多人甚至把一些中药当作日常的茶饮料，例如龙胆叶、金银花、酸枣仁、仙人掌精等。据我们所知 目前，中药与处方药相互作用的信息是有限的。因此，本研究的目的是用体外鸡尾酒法评价11种常用中药对5种主要的cYP同工酶2C9、2D6、2E1、2C19和3A4的潜在抑制作用。 液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)。
- 实验
2.1化学药品和试剂
氯唑沙宗(CZX)、右美沙芬(DE)、托溴丁酰胺(TB)、睾酮(TS)、奥美拉唑(OPZ)、6-羟基氯唑(6-羟氯唑唑)、右旋诺啡(DX)、5-羟基奥美拉唑(OHOPZ)、格列齐特(GL) 安洛尔(PN)、奎尼丁(Qui)和二乙基二硫代氨基甲酸酯(DIE)是从Sigma-Aldrich(美国)购买的。6beta;-羟基睾酮(OHTS)和4-羟基甲苯丁胺(OHTB)是从多伦多采购的。 RCH化学品公司(加拿大)，从罗氏生物科学公司(瑞士)购买beta;-烟酰胺腺嘌呤磷酸二核苷酸(NADPH)。格列齐特，普萘洛尔，酮康唑(KET)，磺胺唑(Sul)， 与噻氯匹啶（TIC）获得了国家食品药品检验所（北京，中国）。乙腈和甲醇的HPLC级购自费舍尔有限公司（艾默生，美国）。宝 OLED人肝微粒体(452161)购自BD Gentest公司。(美国沃伯恩)。其它试剂均属分析级，均来自北京化工厂(中国)。Milli-Q(美国)水 在整个研究过程中都使用过。
2.2TCM材料
经检验的中药材料(表1)是从北京同仁堂集团有限公司购买的。干燥物料(500 G)粉末化，10 g分别在200 mL水或80%乙醇中回流2h。 提取过程重复三次。混合萃取液过滤后浓缩至干燥，在减压下进行水提物和乙醛的萃取。 分别为RACT。每一种萃取物都溶于水或甲醇中，然后用水稀释，在浓度为10.0、5.0、2.5、0.5和0.1毫克/mL的条件下得到一系列的萃取液。
表1五种CYP底物代谢物的LC-MS/MS测定的质量参数及内标
|
P450 enzymes |
Substrates |
Metabolites |
Polarity |
Precursor (m/z) |
Product (m/z) |
Collision energy / V |
|
CYP2C19 |
OPZ |
OHOPZ |
ESI |
262.3 |
214.2 |
15 |
|
CYP2D6 |
DE |
DX |
ESI |
258.1 |
157.2 |
51 |
|
CYP3A4 |
TS |
OHTS |
ESI |
305.1 |
269.3 |
25 |
|
CYP2E1 |
CZX |
OHCZX |
ESI- |
183.8 |
119.9 |
26 |
|
CYP2C9 |
TB |
OHTB |
ESI- |
285.2 |
185.6 |
25 |
|
PN (IS) |
ESI |
261.3 |
116.1 |
32 |
||
|
GL (IS) |
ESI- |
322.4 |
170.2 |
30 |
2.3CYP底物和阳性对照抑制剂
以Tb、OPZ、CZX、TS、DE为原料，在甲醇中溶解，再用100 mmol/L磷酸盐缓冲液稀释，制得Tb、OPZ、CZX、TS、DE等混合基材的原液集中在1000，500，500，500，分别为50mu;mol/L容器中。用甲醇或w分别溶解TIC、Qui、KET、DIE和Sul五种阳性抑制剂的溶液。 然后用水稀释，得到五组不同浓度的缓蚀剂溶液。上述稀释液均于实验前新鲜制备。
2.4CYP酶孵育
用鸡尾酒将HLM与底物共同孵育，测定了中药提取物或阳性抑制剂对CYP同工酶的抑制作用。 孵化方法(Yeet al，2013年)。简单地说，该培养体系含有0.3 mg/ml微粒体蛋白、100 mmol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4)、3.3 mmol/L MgCl 2和1 mmol/L NADPH。 E底物和中药提取物或阳性抑制剂。底物Tb、OPZ、CZX、TS和DE的终浓度分别为100、50、50、50和5mu;mol/L，FI。 孵育系统中的甲醇浓度小于1%。混合物在终体积为100mu;L时，在37℃的摇床水浴中预孵育10 min，并开始反应。 d加入NADPH。孵育30 min后，反应是通过添加冰冷乙腈含有PN和GL在1mu;mu;g／mL培养混合物内部标准100mu;我停止 然后在15000 g离心10 min，4℃，上清液保存于-20℃，直至检测。每组孵育三次。将上清液(10mu;L)注入LC。 -MS/MS系统，用于同时测定产生的底物代谢物的浓度。
2.5LC-MS/MS分析
采用先前所述的LC-MS/MS方法分析了孵化样品中产生的底物代谢物的浓度(ye等人，2013年)。Agilent 1200高效液相色谱系统(美国) 应用生物系统3200 Q阱质量检测器(美国).。简单地说，两种10mu;L的样品被注射到系统中，进行两种独立的检测，并在阳性电喷雾中操作。 Y电离(ESI)模式分别为5500 V和-4000 V负ESI模式(表1)。色谱柱为HPLC C18柱(50 mmtimes;2.1 mm，3.5mu;m，美国安捷伦)。保持在40摄氏度。流动相为：水中甲酸0.1%(A)，乙腈(B)0.1%甲酸，流速0.4 mL/min。A相由5%线性增加到90%，超过0.1。 保持在90%分钟，4分钟，然后立即退到5%的平衡系统。每次测定总运行时间为7 min。
确定的质量条件为：离子源温度为400℃，幕气为1.38times;105Pa，离子源气体为4.14times;105Pa，离子源气体为4.14times;105Pa。检测与量化 通过多反应监测(Mrm)模型对每个底物代谢物和内标物进行了从分子离子到主导产物离子的多反应监测(Mrm)模型、mrm跃迁和相对论性。 e碰撞能列于表1。
2.6数据分析
以底物代谢物峰面积比为内标，计算出底物代谢物的浓度。酶活性以百分比表示。 对照年龄，用代谢物浓度除以阴性对照的方法计算。IC 50值(产生50%抑制酶活性的浓度)是计算值。 利用美国的GraphPad Prism 5.0程序对控制活动剖面中的对数浓度与控制活动剖面百分比进行了非线性回归分析。
- 结果
3.1方法验证
为了验证底物对CYP酶活性的选择性，使用了5种特异性酶抑制剂TIC、QuI、KET、DIE和Sul，测定了它们的IC 50值。它 结果表明，本研究(表2)所得值与文献中的值相似，说明该方法是可靠的。
表2本研究和文献中测定的CYP同工酶阳性抑制剂的IC 50值
|
P450 enzymes |
Inhibitors |
Concentration / |
IC50 / |
IC50 全文共9096字，剩余内容已隐藏，支付完成后下载完整资料
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